荷葉葉綠素如何提取以及測定

荷葉又名蓮葉、藕葉，為睡蓮科蓮屬多年生大型水生草本植物蓮藕的葉片。蓮藕作為生長條件要求不高的水生蔬菜，在我國南北方都有分布，主要分布于長江流域和南方各省。已有研究表明，荷葉營養豐富，除含有普通植物所共有的碳水化合物、脂類、蛋白質、丹寧等常規化學成分外，還富含黃酮類化合物和生物堿。葉綠素作為一種天然色素廣泛應用于醫藥、食品、化妝品等行業，隨著人們生活水平的提高，對天然色素的需求量也日趨增長。而葉綠素測定主要通過葉綠素測量儀進行測量。

本文主要從荷葉葉綠素的提取以及測定來分析。其中荷葉的葉綠素提取過程為：荷葉→洗凈→吸干表面水分→剪碎→稱量→研磨→浸提→離心→測吸光度值。提取具體操作為：浸提溶劑的選擇。稱取荷葉5g，以乙醚、乙醇、甲酰胺、甲醇、丙酮、氯仿、二甲基亞砜7種溶劑為提取劑，料液比1∶50，于常溫條件下分別浸提1d，收集提取液定容后，于波長652nm處測吸光度值，結果可以看出，除了氯仿外，其余提取劑對荷葉葉綠素的提取率都較高，最高的是丙酮。故試驗采用丙酮作為提取溶劑。2.提取劑濃度的選擇。稱取荷葉5g，分別以65%、75%、80%、85%、90%、95%丙酮和無水丙酮為提取劑，料液比1∶10，于50℃加熱回流提取1.5h。定容后，于波長652nm處測吸光度值，結果可以看出，丙酮濃度為80%~90%時，提取效果都較好。3.料液比的選擇。稱取荷葉5g，以85%丙酮為提取劑，料液比分別為1∶5、1∶6、1∶7、1∶8、1∶9，于50℃加熱回流提取1.5h，于波長652nm處測吸光度值，結果可以看出，料液比為1∶7時，提取效果明顯優于其他情況。4.提取溫度的選擇。稱取荷葉5g，以選定的溶劑、料液比，分別在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃加熱回流提取1.5h，提取液定容后，于波長652nm處測吸光度值，結果可以看出，低溫段葉綠素的提取效果都較好，30℃~40℃時提取液吸光度值明顯增大，40℃~60℃時恒定，但當溫度超過60℃以后，提取液吸光度值開始下降，可能和葉綠素本身的熱穩定性有關。選定50℃作為進一步研究的溫度條件。5.提取時間的選擇。稱取荷葉5g，以選定的溶劑、料液比，在50℃分別浸提0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h，提取液定容后，于波長652 nm處測吸光度值，結果可以看出，提取時間為1.5h時，提取效果最好。

通過對荷葉葉綠素提取條件的研究，得出荷葉葉綠素提取的優化工藝是以85%丙酮為提取劑，料液比1∶8，提取溫度50℃，提取時間1.5h。優化工藝下荷葉葉綠素吸光度值為2.249。將葉綠素提取完后，我們就可以進行葉綠素含量的測定，其中測定有化學方法和比較簡單的儀器法。現在一般如果不是精確要求，我們一般都使用葉綠素測量儀進行測定，因為葉綠素測量儀快速、方便，能夠在2秒鐘內顯示出葉綠素SPAD值。